유전Engineering experiment(실험) - PCR과 Transformation
페이지 정보
작성일 23-07-20 06:17
본문
Download : 유전공학 실험 - PCR과 Transformation.hwp
3) 2X Rapid Ligation Buffer - 5 ㎕, pGEM-T Easy Vector (50 ng) - 1 ㎕, PCR product - 3 ㎕, T4 DNA Ligase - 1 ㎕로 총 10㎕를 튜브에 넣고 이 튜브를 1시간 동안 실온에 보관한다.
2. Materials
DNA template, primer, DW, DNA polymerase & Buffer, dNTPs (dATP, dGTP, dCTP, dTTP), PCR tube, micro pipette, column, buffer PB, buffer NW, buffer EB, T vector, 2X Rapid Ligation Buffer, pGEM-T or pGEM-T Easy Vector (50 ng), PCR product, T4 DNA Ligase, gel, 도말 plate, 따뜻한 물, shaking machine3. Methods
1) 형광 발현 유전자를 PCR로 cloning한다.
유전Engineering experiment(실험) - PCR과 Transformation
PCR과 Transformation
實驗(실험) 일시 :
1. Introduction
유전자를 cloning하여 vector에 주입하여 대장균에 주입하여 발현 정도를 observe한다. PCR tube에는 라벨링을 한다. ▶…(drop)④ 2㎕을 전기영동한다.
8) 도말할 gel을 미리 만들어 plate에 부어 굳힌다. 그런 후 4℃에서 보관한다.
② 그 다음 polymerase, buffer들이 있는 PCR tube에 옮겨 담은 다음 잘 섞이도록 pipetting을 해준다. 원심분리 후에는 필터링 된 물질을 제거한다.
③ 1분 동안 추가적으로 원심분리를 하고난 후에 새로운 1.5ml tube로 column을 옮긴다.
⑤ 1.5ml tube에 있는 물질이 정제된 PCR산물.
⑥ 2㎕을 전기영동한다.
▶ PCR tube 속에 있는 파란 물질은 염색을 하기 위한 용도로 전기영동 시에 홈에 주입하였는지 확인을 더 쉽게 할 수 있다아③ 94℃에서 2분 동안 진행하고 94℃에서 30초, 58℃에서 30초, 72℃에서 1분 30초로 한 cycle을 설정하여 35cycle을 진행한다.
5) 튜브를 얼음에 30초 동안 보관한다,
6) 42℃의 물에 90초 동안 놔두었다가 이후 즉시 2분간 얼음에 다시 놔둔다.
④ 30㎕의 buffer EB를 넣고 1분 동안 원심분리를 한다. ▶ 실제 observe은 實驗(실험)이 끝난 후 5일 뒤 observe.
4. Results
1) 전기영동 확인 결과
2) transformation 확인
실험과제/생물의학
유전공학 실험 - PCR과 Transformation , 유전공학 실험 - PCR과 Transformation생물의학실험과제 , 유전공학 실험 PCR과 Transformation
순서
설명
유전공학,실험,PCR과,Transformation,생물의학,실험과제
Download : 유전공학 실험 - PCR과 Transformation.hwp( 91 )
유전Engineering experiment(실험) - PCR과 Transformation
다.
