유전工學(공학) 實驗 - PCR과 Transformation
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작성일 23-03-09 20:00
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PCR과 Transformation
① PCR산물의 볼륨의 5배에 해당하는 양의 buffer PB를 넣은 후에 준비된 column에 모두 옮겨 담고 30초 동안 원심분리 한다. 원심분리 후에는 필터링 된 물질을 제거한다.
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▶ PCR tube 속에 있는 파란 물질은 염색을 하기 위한 용도로 전기영동 시에 홈에 주입하였는지 확인을 더 쉽게 할 수 있따
② 아래쪽에 필터링 된 물질을 pipette으로 제거한 후 buffer NW를 700㎕ 추가한 후에 30초 동안 원심분리 한다. 3. Methods
유전자를 cloning하여 vector에 주입하여 대장균에 주입하여 발현 정도를 觀察(관찰) 한다.
유전工學(공학) 實驗 - PCR과 Transformation
PCR과 Transformation 실험 일시 : 1. Introduction 유전자를 cloning하여 vector에 주입하여 대장균에 주입하여 발현 정도를 관찰한다. PCR tube에는 라벨링을 한다.
▶ cycle이나 온도, 시간의 설정은 충분히 primer가 붙을 수 있도록 설정한다.
2) PCR산물을 분리, 정제한다.
實驗 일시 :
③ 94℃에서 2분 동안 진행하고 94℃에서 30초, 58℃에서 30초, 72℃에서 1분 30초로 한 cycle을 설정하여 35cycle을 진행한다.
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① 튜브에 DNA template 1㎕, FW primer 2㎕, RV primer 2㎕, DW 15㎕를 넣으려고 하였으나 실패의 가능성이 있으므로 각각 2배의 양으로 한다.
. Materials
1. Introduction
② 그 다음 polymerase, buffer들이 있는 PCR tube에 옮겨 담은 다음 잘 섞이도록 pipetting을 해준다.
순서
④ 2㎕을 전기영동한다. 그런 후 4℃에서 보관한다.
다.
설명
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1) 형광 발현 유전자를 PCR로 cloning한다.
